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Protein A Sepharose 4FF 產(chǎn)品使用說明書

發(fā)布時(shí)間:2013/9/9      點(diǎn)擊次數(shù):4247

Protein A Sepharose 4FF 產(chǎn)品使用說明書

——高IgG結(jié)合特異性 高流速 低蛋白A脫落

產(chǎn)品特點(diǎn)

特點(diǎn)

 

結(jié)合特異性強(qiáng),基團(tuán)脫落少

顆粒大小

50-160 μm

基質(zhì)

4%的交聯(lián)瓊脂糖凝膠

推薦流速

50-300cm/h

配基

重組protein A

使用溫度

常溫

配基密度

6mg重組蛋白A/ml

pH范圍

3-10

動(dòng)態(tài)吸附載量

60mg人IgG/ml

保存溫度

+4~8℃

蛋白A殘留

小于3ng蛋白A/mg IgG

保存液體

20%乙醇

 

Protein A Sepharose 4FF ,上海起福生物專業(yè)代理,:

 產(chǎn)品介紹

Protein A sepharose介質(zhì)是經(jīng)過我們公司長(zhǎng)期開發(fā),在公司生產(chǎn)的native protein A 的基礎(chǔ)上精致而成。通過Protein A Sepharose 4FF,可分離和純化多種哺乳動(dòng)物不同亞型的抗體或包含抗體Fc片段的基因工程重組蛋白。本產(chǎn)品相對(duì)同類產(chǎn)品具有如下優(yōu)勢(shì):

1、偶聯(lián)條件溫和,更好的保持了protein A的構(gòu)象,所以抗體載量高,同體積的介質(zhì),相同規(guī)模的純化設(shè)備,相同體積介質(zhì),抗體的產(chǎn)量明顯高于用同類產(chǎn)品,大大的降低了抗體藥物生產(chǎn)成本。

2、非常穩(wěn)定,不易脫落,用其生產(chǎn)的抗體中protein A的殘留比同類產(chǎn)品的更少。

3、公司的Protein A 以及Protein A sepharose的生產(chǎn)都是在清潔車間生產(chǎn),符合制藥企業(yè)生產(chǎn)需求。

4、公司生產(chǎn)的Protein A sepharose使用壽命長(zhǎng),常規(guī)條件下能夠重復(fù)使用100次以上。

 

 

使用說明

(1)緩沖液的準(zhǔn)備:

平衡緩沖液:純化不同動(dòng)物和不同亞型抗體時(shí)所用平衡緩沖液是不同的,部分參照如下: 抗體種類

平衡緩沖液成分

人IgG1、人IgG2、小鼠IgG2a、小鼠IgG2b

10mM 磷酸鹽緩沖液,150mM NaCl,pH 7.21

人IgG3、人IgG4、小鼠IgG1、大鼠IgG3

50mM Tris-Cl,3M NaCl,pH7.8-8.5

 

(2)樣品的準(zhǔn)備

樣品上柱前先用平衡緩沖液稀釋5至10倍,從而確保樣品液的成分和pH與平衡緩沖液相近。如果上樣體積過大,可以采取調(diào)節(jié)上樣液pH和鹽濃度的方式,使樣品的pH和電導(dǎo)與平衡液接近,使樣品中的緩沖體系與平衡緩沖液相同。

細(xì)胞培養(yǎng)液中大量的血清蛋白會(huì)對(duì)親和層析造成一定的干擾,去血清處理或稀釋樣品將提高純化抗體收率。

樣品在上柱前也需0.45μm微孔濾膜過濾。

(3)操作步驟

a) 填料裝柱后,用純水流洗至少3個(gè)柱管體積,以沖掉乙醇,再用平衡緩沖液流洗至少5個(gè)柱管體積來平衡柱子。

b) 將樣品上柱,上樣流速控制在60cm/h。

c) 平衡緩沖液再洗5-10個(gè)柱床體積,把UV洗至基線。

d) 洗脫緩沖液洗脫,收集洗脫峰,立即用中和緩沖液中和到中性。

e) 再生緩沖液流洗3-5個(gè)柱床體積。先后用純水、20%乙醇分別流洗3-5個(gè)柱床體積。柱子置于+4-8℃保存。

操作中如果沒有在線的蛋白監(jiān)測(cè)系統(tǒng),洗脫峰時(shí)可以分階段

收集,zui后根據(jù)測(cè)定結(jié)果合并活性部分。

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